羅甸小米核桃葉綠素含量測定過程中的一些問題探討

葉綠素是植物葉片進行光合作用最重要的物質之一,其素含量是反映植物光合作用能力的重要指標。針對葉綠素含量測定,國內外進行了諸多相關的研究，如用丙酮法提取葉綠素、葉綠素測量儀測量法、用二甲基亞砜直接浸提植物葉片葉綠素等等。每種方法都有其各自的優缺點，但是在實際應用中，現階段最多的使用葉綠素測量儀進行測定，因為該方法最快捷簡單。而且精確度極高。

運用Arnon過濾法所測定的葉綠素含量與其他方法相比差別很大,主要原因可能是Arnon法測定葉綠素含量時需要過濾,過濾過程造成了葉綠素含量的部分損失。Arnon離心法相對于Arnon過濾法效率稍高。浸提法測定葉綠素含量的效率排序依次為: 80%丙酮浸提法<95%乙醇浸提法<三混液浸提法<雙混液浸提法。

另外，隨著乙醇在混合液中比例的增大,協同作用隨之增大,乙醇與丙酮的比例達到1∶1時含量達到最大;隨后繼續往丙酮中加入乙醇,協同作用開始變小。可見,當乙醇與丙酮的比例達到1∶1時,對羅甸小米核桃葉綠素的浸提最充分。通過不同配比協同作用試驗表明,當無水乙醇與無水丙酮比例為1∶1時浸提量最大,所以,單因素試驗采用上述溶液為試驗浸提溶液。在葉綠素浸提相關文獻中,提出了浸提溫度、浸提時間和浸提料液比這3個對葉綠素浸提影響最主要的因素。在相同浸提溫度和浸提料液比的情況下,當浸提時間從2 h增加到5 h時,羅甸小米核桃葉綠素含量逐漸升高,并在5 h時達到最大,然后隨著浸提時間繼續增加,葉綠素含量則不斷下降。這說明葉綠素最適浸提時間為5 h,不足或超過5 h,葉綠素的提取是不充分的。這是由于在浸提開始后,葉綠素有一個由組織向外擴散的過程,因此提取出的葉綠素不斷增加。當浸提時間為5 h時,組織中葉綠素向提取溶劑的擴散作用達到平衡,溶液中葉綠素含量達到最高。浸提時間超過5h后,溶液中葉綠素含量開始下降。其可能原因是隨著浸提時間的增長,羅甸小米核桃葉綠素暴漏在光線下的時間也就越長,對光的不穩定性造成葉綠素含量不斷下降。